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情绪调节机理模型之HPA轴抗抑郁作用

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发表于 2018-2-9 12:07:30 | 显示全部楼层 |阅读模式
情绪调节机理模型之HPA轴抗抑郁作用
功效:抗抑郁作用
机理:通过降低促肾上腺皮质激素释放因子CRF/ CRH的合成或是增加糖皮质激素受体GR蛋白的表达,下调应激小鼠血清ACTHCORT水平,拮抗HPA轴功能亢进,使亢进的HPA轴功能恢复正常,进而达到抗抑郁的功效。
指标:促肾上腺皮质激素(ACTH)皮质酮( CORT)
活性成分:橙皮苷,川芎嗪,芍药内酯苷( Alb)
依据
1、下丘脑-垂体-肾上腺轴 (The hypothalamic-pituitaryadrenal axis ,HPA or HTPA axis),也被叫做边缘系统-下丘脑-垂体-肾上腺轴(LHPA轴),是一个直接作用和反馈互动的复杂集合,包括下丘脑(脑内的一个中空漏斗状区域),脑垂体(下丘脑下部的一个豌豆状结构),以及肾上腺(肾脏上部的一个小圆椎状器官)。这三者之间的互动构成了HPA轴。HPA轴是神经内分泌系统的重要部分,参与控制应激的反应,并调节许多身体活动,如消化,免疫系统,心情和情绪,性行为,以及能量贮存和消耗。从最原始的有机体到人类,许多物种,都有HPA轴。它是一个协调腺体,激素和部分中脑(特别是参与介导一般适应综合征 (GAS)的中脑区域)相互作用的机制。
下丘脑通过分泌促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin-releasingfactorCRF,又称促肾上腺皮质素释放激素/ CRH)和精氨酸加压素(arginine vasopressinAVP)调控HPA轴活性。CRFAVP分别与垂体前叶上的CRF1V1b受体结合,诱导促肾上腺皮质激素(adrenal corticotropichormoneACTH) 的分泌;ACTH 进入体循环后促使肾上腺皮质分泌糖皮质激素(灵长类动物为皮质醇,啮齿类为皮质酮CORT)。糖皮质激素(glucocorticoidsGC与多个靶组织(包括HPA轴)上的受体结合后发挥生理效应。当机体GC浓度升高时(如应激状态),GC 就会与糖皮质激素受体(glucocorticoid receptorGR)结合,负反馈抑制下丘脑分泌CRFAVP,使亢进的HPA轴恢复到基础水平。如果长期应激使HPA轴功能持续亢进,过量的GC不断刺激GR,使GR受损,不能有效抑制HPA轴亢进,两者互为因果,形成恶性循环,损伤海马神经元,导致以海马为重要组成部分的情感调节中枢功能失常,就可能引发抑郁症。


实验
1、橙皮苷
1)分组与给药
60 只大鼠适应饲养1周,随机分为正常组、CUMS 模型组、橙皮苷低、中、高剂量组( 4080160 mg·kg
1) 及阳性药氟西汀组( 10 mg·kg1) ,每组 10 只。于 CUMS 造模同时,各组动物灌胃给药,每日1次,连续21 d,正常组及模型组给予同体积的0. 5%羧甲基纤维素钠。
(2)血清CORT水平和肾上腺指数的检测
末次实验后,称量大鼠体重并断头处死,收集全血,静置30 min后离心取上清,按ELISA试剂盒说明书检测CORT 水平。同时迅速分离并取出大鼠双侧肾上腺组织,称重并计算肾上腺指数 = 肾上腺质量( mg)/体重( g)×100%
(3)实时定量 PCR( Q-PCR) 检测下丘脑 CRF m R-NA 表达
分离大鼠下丘脑组织,Trizol 法提取总RNA 并进行逆转录,Q-PCR 采用SYBR Green染料法,反应条件: 50 2 min; 95 10 min40 个循环(95℃,15s; 64 60 s)
(4)免疫组化法检测下丘脑室旁核GR的表达
按免疫组化试剂盒说明书进行,用PBS代替一抗作为阴性对照。
5)结果





2、川芎嗪
1)分组及给药
SPF级雄性C57小鼠,体质量1822 g,购自维通利华实验动物中心,动物生产许可证号: SCXK() 2012-0001
40只小鼠随机分为4: 空白对照组; 川芎嗪120 mg /kg低剂量; 川芎嗪240 mg /kg高剂量; 阿米替林5 mg /kg阳性对照组。
2HPA 轴血清激素水平检测
行为学检测结束后15 min,断头处死小鼠,取血,4℃,3 000 r/min的条件下,离心15 min,分离获得血清,-20℃保存待测。采用放射性免疫法测定血清促肾上腺皮质激素释放激素CRH、促肾上腺皮质激素ACTH和皮质酮CORT含量。
3)结果


3、芍药内酯苷( Alb)
1)分组及给药
嗅球切除术后每天对大鼠抚摸、称重,恢复14d后根据体质量随机分为假手术组、嗅球切除模型( olfactory bulbectomyOB )组、 给予盐酸丙咪嗪IMI 5.0mg·kg1组、给予Alb 2.55.010.0mg·kg1组。每天给药2( 给药体积2 m L·kg1) ,假手术组与模型组给予相应体积的生理盐水,连续给药14 d
2ELISA 法检测血清皮质酮和促肾上腺皮质激素水平
开场实验结束后,动物断头取血,血液样品于4℃冰箱静置1h后离心20 min( 3000×g) ,取上清液并分装,放入-70℃冰箱保存。采用ELISA法检测血清皮质酮和促肾上腺皮质激素水平。
3Western 蛋白质印迹法检测脑组织海马糖皮质激素受体表达
行为检测结束后,处死大鼠,取脑并迅速在冰上分离海马脑区,单侧海马称重后,加入蛋白裂解液,用超声细胞和组织破碎仪破碎90 s,频率每秒20次,冰上继续裂解30 min4℃离心30 min( 12 000×g) ,吸取上清置于-70℃保存。
4)结果




结果对比
1、皮质酮( CORT)
剂量(mg/kg
CORT含量
变化幅度(%
橙皮苷
模型组
104.47nmol/L
40
90.86
13.03
80
84.62
19.00
160
75.24
27.98
川芎嗪
模型组(87.10nmol/L
120
65.00
25.54
240
64.18
26.31
芍药内酯苷
模型组
444ng/L
2.5
259
41.67
5.0
278
37.39
10.0
292
34.23
根据表格,可以看出三个活性成分的抗抑郁功效大小:
芍药内酯苷>橙皮苷>川芎嗪

2GR蛋白

剂量(mg/kg
GR蛋白表达
变化幅度(%
橙皮苷
模型组
0.076
40
0.119
56.58
80
0.149
96.05
160
0.198
160.53
芍药内酯苷
模型组
0.20
2.5
0.99
395
5.0
1.08
440
10.0
1.26
530


3促肾上腺皮质激素(ACTH)
剂量(mg/kg
ACTH含量
变化幅度(%
川芎嗪
模型组(58.27ng/mL
120
44.58
23.49
240
42.21
27.76
芍药内酯苷
模型组
59ng/L
2.5
50
15.25
5.0
50
15.25
10.0
50
15.25


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发表于 2018-2-9 20:11:27 | 显示全部楼层
1 请再弄清皮质酮对消化、代谢、身体活动、免疫等等的影响机制。
2 下丘脑 表达 CRH 的mRNA 有几个调节通路,GR蛋白是其中之一,除此之外还有吗?
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